1、確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。

  2、將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。

  3、酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘。

  4、反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。

  5、將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。

  6、0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。

  7、將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。

  8、0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。

  9、按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應，反應過程中，要經常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有    明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應zui長不要超過30分鐘）。

  10、用酶標儀在450nm測定O.D.值。

  11、根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。